ChroZen Catecholamine Analyzer — готовое решение для определения катехоламинов и их метаболитов в биологических жидкостях.
Катехоламины — группа природных соединений симпатической нервной системы, работающих как гормоны и нейромедиаторы: адреналин, норадреналин, дофамин. Химически они близки — ароматическая часть (катехол) плюс аминогруппа.
В чём сложность анализа. Аминогруппа делает катехоламины склонными к окислению в слабощелочной и нейтральной среде. Именно поэтому их традиционно определяют электрохимическим детектором, использующим электроны, выделяющиеся при окислении амина. Но та же нестабильность создаёт проблемы: белковое загрязнение проб, деградация при неправильном хранении и обращении, ошибки при ручном смешивании реагентов, долгий выход электрохимического детектора на стабильный режим. Неоптимальная настройка детектора снижает чувствительность и увеличивает разброс результатов.
Решение производителя — поставлять анализ целиком: реагенты для пробоподготовки, растворители, стандартные реагенты и аналитическую колонку в одном комплекте, с прописанными протоколами. Это снимает разброс, вносимый ручным приготовлением растворов.
Определяемые соединения (с молекулярными массами): норадреналин 169,18; адреналин 183,2; гидроксиметоксифенилгликоль в виде пиперазиновой соли 454,52 (свободная форма 368,38); норметанефрина гидрохлорид 219,67 (183,2); дофамина гидрохлорид 189,64 (153,18); дигидроксифенилуксусная кислота 168,15; гомованилиновая кислота 182,18; 3-метокситирамина гидрохлорид 203,6 (167,24); серотонина креатинин сульфат 405,43 (176,22); 5-гидроксииндолуксусная кислота 191,19; изопротеренола гидрохлорид 247,72 (211,26).
Протоколы пробоподготовки из каталога. Катехоламины в моче: 3,0 мл пробы, 6,0 мл буфера разбавления и 100 мкл внутреннего стандарта, доведение pH до 3–7 раствором 1 н. гидроксида натрия, пропускание через картридж ТФЭ, промывка 10 мл очищенной воды, элюирование 6,0 мл буфера. Катехоламины в плазме: 0,5 мл экстракционного буфера в колонку пробоподготовки, 50 мкл внутреннего стандарта и 1,0 мл плазмы, пропускание через картридж, трёхкратная промывка 1,0 мл промывочного буфера с центрифугированием, 120 мкл элюирующего буфера, выдержка 2 минуты при комнатной температуре, центрифугирование 2000 об/мин 1 минуту. Серотонин в сыворотке: к 200 мкл пробы 100 мкл внутреннего стандарта и 50 мкл осадителя, перемешивание 30 секунд, центрифугирование 9000 об/мин 5 минут, отбор верхнего слоя. Ванилилминдальная и гомованилиновая кислоты, 5-гидроксииндолуксусная кислота в моче: 50 мкл пробы, 1 мл внутреннего стандарта, картридж ТФЭ, двукратная промывка 3 мл промывочных буферов, элюирование 2 мл.
Условия анализа катехоламинов в плазме: подвижная фаза и колонка — по набору Chromsystems; расход 1,3 мл/мин; термостат колонки 35 °C; электрохимический детектор при +500 мВ и 2 нА, рабочий электрод из стеклоуглерода; ввод 20 мкл петлёй.
Применение: анализ катехоламинов в плазме и моче.
